Recombinant DNA technology (Genetic engineering)

- Recombinant DNA technology

- DNA cloning

- PCR

- DNA sequencing

- การแยกจีนออกจากโครโมโซมของเซลล์

การใช้ recombinant DNA techniques ทำให้ทราบถึงโครงสร้างของจีน เทคนิคนี้มีขั้นตอนการทำดังต่อไปนี้


1. การตัดโมเลกุล DNA ออกเป็นชิ้นส่วนโดยการใช้เอนไซม์ที่มีชื่อว่า เรสตริกชันเอนโดนิวคลีเอส (restriction endonuclease) ซึ่งมีคุณสมบัติตัด DNA เฉพาะตรงการเรียงลำดับของนิวคลีโอไทด์ที่จำเพาะเท่านั้น เพราะ ฉะนั้นจีนเดี่ยวหรือกลุ่ม ของจีนที่ถูกตัดจะอยู่ในลักษณะเป็นชิ้นส่วน DNA สั้นๆ


2. การทำให้ชิ้นส่วน DNA บริสุทธิ์ ชิ้นส่วน DNA ที่ได้จะถูกแยกออกจากกันโดยใช้เทคนิค อะกาโรส เจล อิเล็กโทรโฟรีซิส (agarose gel electrophoresis) หรือ HPLC (high pressure liquid chromatography) เมื่อ DNA ชิ้นสั้นๆแยกออกจากกันแล้ว เราสามารถ แยก DNA ออกจากเจลในรูป บริสุทธิ์ได้


3. การทำ cloning เพื่อให้ได้จีนที่ต้องการในปริมาณสูง โดยการนำชิ้นส่วน DNA ที่บริสุทธิ์ใส่เข้าไปใน cloning vector นำ cloning vector ที่มี DNA ที่ต้องการหรือ recombinant DNA ใส่เข้าไปในเซลล์เจ้าบ้าน (host cell) เพื่อให้เกิดการสร้าง DNA ปริมาณสูง


4. การทำ PCR (polymerase chain reaction) เพื่อให้ได้จีนที่ต้องการในปริมาณสูง เป็นอีกวิธีหนึ่งนอกเหนือ จากการทำ gene cloning


5. การหาการเรียงลำดับของนิวคลีโอไทด์ของจีน